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本发明公开了一种耐寒天竺桂的不定芽诱导及增殖和植株再生方法,步骤包括:1)选取无病害幼嫩的耐寒型天竺桂茎段,将其剪成带有1?2个腋芽或顶芽的茎段,灭菌消毒备用;2)将灭菌消毒后的茎段垂直接种在不定芽诱导培养基上,培养28d以上。其中,不定芽诱导培养基的配方为:基本培养基+0~1mg/L生长素,生长素为TDZ、GA、NAA、BA中的1种以上;3)将增殖的不定芽逐个分开,选取伸长值1.0~2.0cm的不定芽垂直接种于生根培养基中,培养28d;其中,生根培养基配方为:基本培养基+生长素。该方法利用长势优良的天竺桂的幼嫩茎段作为外植体,通过基本培养基的选择,激素种类及浓度配比的筛选,建立高效的离体快速繁殖体系,为进一步的离体保存和繁育天竺桂奠定基础。